foodsystFood systemsПищевые системы2618-97712618-7272Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова РАН10.21323/2618-9771-2020-4-2-97-105foodsyst-109Research ArticleСтатьиSaline extraction as a method of obtaining a mixture of biologically active compounds of protein nature from a porcine pancreasВодно-солевая экстракция как метод получения смеси биологически активных соединений белковой природы из поджелудочной железы свиньиhttps://orcid.org/0000-0002-4752-3939ВасилевскаяЕ. Р.VasilevskayaE. R.

Василевская Екатерина Романовна — кандидат технических наук, научный сотрудник, экспериментальная клиника — лаборатория биологически активных веществ

109316, г. Москва, ул. Талалихина, 26

Ekaterina R. Vasilevskaya — candidate of technical sciences, researcher, Experimental clinic-laboratory of biologically active substances of animal origin

26, Talalikhina str., 109316, Moscow

e.vasilevskaya@fncps.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6886-496XАрюзинаМ. А.AryuzinaM. A.

Арюзина Марина Александровна — старший лаборант, экспериментальная клиника -лаборатория биологически активных веществ

109316, г. Москва, ул. Талалихина, 26

Marina A.  Aryuzina — senior laboratory assistant, Experimental cliniclaboratory of biologically active substances of animal origin

26, Talalikhina str., 109316, Moscow

m.aryuzina@fncps.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2219-5964ВетроваЕ. С.VetrovaE. S.

Ветрова Евгения Сергеевна — старший лаборант, экспериментальная клиника — лаборатория биологически активных веществ

109316, г. Москва, ул. Талалихина, 26

Evgeniya S.  Vetrova — senior laboratory assistant, Experimental cliniclaboratory of biologically active substances of animal origin

26, Talalikhina str., 109316, Moscow

e.vetrova@fncps.ruФедеральный научный центр пищевых систем им. В. М. Горбатова Российской академии наукРоссияV. M. Gorbatov Federal Research Center for Food Systems of Russian Academy of SciencesRussian Federation2021220720214297105Copyright © Vasilevskaya E.R., Aryuzina M.A., Vetrova E.S., 20212021Василевская Е.Р., Арюзина М.А., Ветрова Е.С.Vasilevskaya E.R., Aryuzina M.A., Vetrova E.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.fsjour.com/jour/article/view/109

A relevant solution to the problem of processing meat industry waste in Russia is to obtain useful biologically active compounds from abundant organs. The aim of this study was to examine the effectiveness of the saline extraction as a method for extracting a mixture of promising biologically active compounds from the porcine pancreas, as well as to determine the optimal time for the process. The study consisted of extraction of the porcine pancreas with 0,9% sodium chloride solution for 5 h 30 min with further determination of the total protein concentration and proteomic profile of the samples taken throughout the process. Based on the analysis of the dependence of the total protein content in the extractant on time, the optimal extraction time was determined to be 135–150 minutes. When studying the results of electrophoresis and the data of their processing, the optimal extraction time for the targeted isolation of the low-molecular fraction of compounds was also determined to be 90 min. At the same time, 13 protein bands with a molecular weight of 52 kDa and below were found on the electropherograms. Saline should be considered applicable for obtaining extracts rich in biologically active substances, incl. hormones, enzymes and other physiologically active compounds.

Актуальным решением проблемы переработки отходов мясной промышленности в России является получение полезных биологически активных соединений из богатых ими органов. Целью настоящего исследования было изучение эффективности метода экстракции физиологическим раствором как способа извлечения смеси перспективных биологически активных соединений из поджелудочной железы свиньи, а также определение оптимального времени процесса. Исследование заключалось в проведении экстракции поджелудочной железы 0,9% раствором натрия хлорида в течение 5 ч 30 мин с дальнейшим определением общей концентрации белка биуретовым методом. Также получен протеомный профиль образцов, отбираемых на протяжении всего процесса, методом одномерного денатурирующего электрофореза по Лэммли в 12,5% полиакриламидном геле. На основе анализа зависимости содержания общего белка в экстрагенте от времени определено оптимальное время экстракции, которое составило 135–150 мин. По результатам электрофореза и данных биоинформационного анализа оптимальное время экстракции для целенаправленного выделения низкомолекулярной фракции соединений составляло 90 мин. На электрофореграммах обнаружены 13 белковых полос с молекулярной массой 52 кДа и ниже. Таким образом, 0,9% раствор натрия хлорида применим для получения экстрактов, богатых биоактивными веществами, в том числе гормонами, ферментами и другими физиологически активными соединениями.

побочное сырьеизвлечение биомолекулбиоактивные веществаэлектрофорезby-product raw materialsextraction of biomoleculesbioactive compoundselectrophoresisСтатья подготовлена в рамках выполнения исследований по Государственному заданию № FNEN 2019–0008 Федерального научного центра пищевых систем им. В. М. Горбатова Российской академии наукThe article was published as part of the research topic No. FNEN 2019–0008 of the state assignment of the V. M. Gorbatov Federal Research Center for Food Systems of RASReferencesКозырев, И. В., Федулова, Л. В. (2016). Повышение прибыли предприятия за счет сбора эндокринноферментного и специального сырья. Мясные технологии, 3, 6–11.Kozyrev, I. V., Fedulova, L. V. (2016). Increasing the profit of the enterprise due to the collection of endocrine-enzyme and special raw materials. Meat Branch, 3, 6–11. (In Russian)Сусь, И.В., Люблинская, Л.А., Бабурина, М.И. (2010). «Первичка» для мясной промышленности и не только. Все о мясе, 5, 20–23.Sus’ I.V., Lyublinskaya, L.A., Baburina, M.A. (2010). “Primary” for the meat industry and not only. Vsyo o myase, 5, 20–23. (In Russian)Василевская, Е.Р. (2019). Разработка кормовой добавки на основе биологически активных веществ из сырья животного происхождения. Автореф. дис. … канд. техн. наук. Москва: ФНЦ пищевых систем им. В. М. Горбатова» РАН. — 24 с.Vasilevskaya E. R. (2019). Development of a feed additive based on biologically active substances from raw materials of animal origin. Author’s abstract of the dissertation for the scientific degree of Candidate of Technical Sciences. Moscow: Gorbatov Research Center for Food Systems. — 24 p. (In Russian)Савельева, Т.И., Асланова, Т.А., Гордиенко, И.М. (2018, 20 декабря). Технология получения биологически активных пептидов из вторичного сырья животного происхождения. Cборник III Всероссийской (национальной) научной конференции. Новосибирск: Новосибирский государственный аграрный университет, 2018.Savel’yeva, T.I., Aslanova, T.A., Gordiyenko, I.M. (2018, 20 December). Technology for obtaining biologically active peptides from secondary raw materials of animal origin. Processing of the III All-Russian (national) Scientific Conference. Novosibirsk: Novosibirsk State Agrarian University, 2018. (In Russian)Чернуха, И.М., Федулова, Л.В., Василевская, Е.Р., Ертикеева, Е.А., Ахремко, А.Г. (2015). Соединения антимикробного действия в слизистых оболочках животных. Все о мясе, 5, 32–35.Chernukha, I.M.., Fedulova, L.V., Vasilevskaya, E.R., Ertikeeva, E.A., Akhremko, A.G. (2015). Research of mucous membranes of animals. Vsyo o myase, 5, 32–35. (In Russian)Василевская, Е.Р. (2019, 1–11 июня). Тканеспецифичные белки, полученные с использованием воды с модифицированным изотопным составом. Материалы Международной конференции NT + M&Ec`2019. Гурзуф: ООО «Институт новых информационных технологий», 2019.Vasilevskaya, E.R. (2019, 1–11 June). Tissue specific proteins extracted with water with modified isototic composition. Materials of the International Conference NT + M&Ec ‘ 2019. Gurzuf: Institute of New Information Technologies, 2019. (In Russian)Василевская, Е.Р., Иванова, Е.А. (2018). Вода с пониженным содержанием дейтерия как основа для получения биологически активных веществ из иммунных органов Sus scrofa. Международная научнопрактическая конференция, посвящённая памяти Василия Матвеевича Горбатова. Москва: ФНЦ пищевых систем им. В. М. Горбатова РАН, 2018. № 1. — С. 43–45.Vasilevskaya, E.R., Ivanova, E.A. (2018). Water with a reduced deuterium content as a basis for obtaining biologically active substances from the immune organs of Sus scrofa. International scientific and practical conference dedicated to the memory of Vasily Matveyevich Gorbatov, 2018. 1, 43–45. (In Russian)Котенкова, Е.А., Василевская, Е.Р., Ахремко, А.Г. (2017, 2–12 июня). Влияние воды с модифицированным изотопным D/H составом на белково-пептидный профиль экстр актов животного происхождения. Материалы Международной конференции. Гурзуф: ООО «Институт новых информационных технологий», 2017.Kotenkova, E.A., Vasilevskaya, E.R., Akhremko, A.G. (2017, 2–12 June). Deuterium depleted water influence on protein-peptide profile in extracts prepared from animal immune organs. Materials of the International Conference. Gurzuf: Institute of New Information Technologies, 2019. (In Russian)Федулова, Л.В., Василевская, Е.Р. (2017, 8–9 июня). Биотехнологические аспекты разработки природного иммунокорректора как прогрессивная технология высококачественной продукции животноводства. Материалы Международной конференции. Волгоград: Сфера, 2017.Fedulova, L.V., Vasilevskaya, E.R. (2017, 8–9 June). Biotechnological aspects of the development of a natural immunocorrector as a progressive technology for high-quality livestock products. Materials of the International Conference. Volgograd: Sfera, 2017. (In Russian)Джимак, С.С., Федулова, Л.В., Василевская, Е.Р., Басов, А.А. (2019, 1–11 июня). Влияние различных фракций полипептидов, полученных из органов иммунной системы Sus scrofa на иммунологическую реактивность крыс. Материалы Международной конференции NT + M&Ec`2019. Гурзуф: ООО «Институт новых информационных технологий», 2019.Dzhimak, S.S., Fedulova, L.V., Vasilevskaya, E.R., Basov, A.A. (2019, 1–11 June). Influence of different polypeptides fractions derived from Sus scofa immune organs on the rats immunological reactivity. Materials of the International Conference NT + M&Ec ‘ 2019. Gurzuf: Institute of New Information Technologies, 2019. (In Russian)Mora, L., Reig, M., Toldrá, F. (2014). Bioactive peptides generated from meat industry by-products. Food Research International, 65(PC), 344–349. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2014.09.014Mora, L., Reig, M., Toldrá, F. (2014). Bioactive peptides generated from meat industry by-products. Food Research International, 65(PC), 344–349. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2014.09.014Дамдинсурэн, Л., Алимаа, Ж., Чимэгээ, Н., Ариунаа, Э. (2016). Биологически активные вещества животного происхождения. Материалы конференции: Теоретические и практические вопросы интеграции химической науки, технологии и образования. Улан-Удэ: Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления, 2016.Damdinsuren L., Alimaa, Zh, Chimegee, N., Ariunaa, E. (2016). Biologocally active compounds of animal origin. Materials of the International Conference. Ulan-Ude: East Siberian State University of Technologies and Management, 2016. (In Russian)Салова, Т. Ю., Громова, Н. Ю. (2016). Теоретические аспекты получения биологически активных веществ из растительного и животного сырья. Успехи современного естествознания, 3, 39–43.Salova, T. Yu., Gromova, N. Yu. (2016). Theoretical aspects of obtaining biologically active substances from plant and animal materials. Advances in Current Natural Sciences, 3, 39–43. (In Russian)Котенкова, Е. А. (2018). Антимикробные биологически активные вещества, выделенные из слизистых оболочек свиней, как альтернативной подход к продлению сроков годности пищевой продукции. Вопросы питания, 87(S5), 278–279.Kotenkova, E. A. (2018). Antimicrobial biologically active substances isolated from the mucous membranes of pigs as an alternative approach to extending the shelf life of food products. Problems of Nutrition, 87(S5), 278–279. (In Russian)Новиков, Д. А. (2014). Выделение и очистка продуктов биотехнологии. Методическое пособие. Минск: БГУ, 2014.Novikov, D. A. (2014). Isolation and purification of biotechnology products. Minsk: BGU, 2014. (In Russian)Притужалова, А.О. (2017). Анатомия и морфология поджелудочной железы крупного рогатого скота. Молодежь и наука, 4–1, 55.Prituzhalova, A. O. (2017). Anatomy and morphology of the pancreas of cattle. Youth and Science, 4–1, 55. (In Russian)Нефёдова, А. Р., Парамонова Р. Н. (2019). Инсулинотерапия XX века и производство инсулина в СССР. Память о прошлом –2019. 89–95.Nefyodova, A. R., Paramonova, R. N. (2019). Insulin therapy of the 20th century and insulin production in the USSR. 89–95. (In Russian)Torcello-Gómez, A., Dupont, D., Jardin, J., Briard-Bion, V., Deglaire, A., Risse, K. et al. (2020). Human gastrointestinal conditions affect: In vitro digestibility of peanut and bread proteins. Food and Function, 11(8), 6921–6932. https://doi.org/10.1039/d0fo01451fTorcello-Gómez, A., Dupont, D., Jardin, J., Briard-Bion, V., Deglaire, A., Risse, K. et al. (2020). Human gastrointestinal conditions affect: In vitro digestibility of peanut and bread proteins. Food and Function, 11(8), 6921–6932. https://doi.org/10.1039/d0fo01451fMuntholib, Sulistyaningrum, D., Subandi, Marfu’ah, S. (2020). Identification of flavonoid isolates of papaya (carica papaya L.) seed and their activity as pancreatic lipase inhibitors. Paper presented at the AIP Conference Proceedings, 2231, Article 3456. https://doi.org/10.1063/5.0003456Muntholib, Sulistyaningrum, D., Subandi, Marfu’ah, S. (2020). Identification of flavonoid isolates of papaya (carica papaya L.) seed and their activity as pancreatic lipase inhibitors. Paper presented at the AIP Conference Proceedings, 2231, Article 3456. https://doi.org/10.1063/5.0003456Пат. № 2088241. Способ получения основного ингибитора протеаз из легкого и поджелудочной железы крупного рогатого скота / Пак В. Н., Овечкина Л. Г. Опубл. 28.07.1997.Pak V. N., Ovechkina L. G. A method of obtaining the main protease inhibitor from the lung and pancreas of cattle. Patent RF, no.2088241, 1997. (In Russian)Заболоцкая, Е. Р., Виноходов, Д. О. (2018). Современные методы выделения и очистки ферментов. отделение нуклеаз от протеолитических ферментов в экстракте поджелудочной железы крупного рогатого скота. Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета), 47(73), 62–68.Zabolockaya, E. R., Vinohodov, D. O. (2018). Modern methods of isolation and purification of enzymes. Separation of nucleases from proteolytic enzymes in extract of pancreas of cattle. Processing St. Petersburg State Institute of Technology (Technical University), 47(73), 62–68. (In Russian)Барбашов, К.А., Шубина. Т.П. (2020, 30 апреля). Поджелудочная железа у животных. Сборник статей XXVIII международной научно-практической конференции. 2020 — Москва: Актуальность РФ,2020.Barbashov, K.A., Shubina, T.P. (2020, 30 April). Pancreas in animals. Collection of articles of the XXVIII International Scientific and Practical Conference Moscow: Current news, 2020. (In Russian)Кашинова, Э.Б., Котенкова, Е.А., Ертикеева, Е.А., Ахремко, А.Г. (2016). Оптимизация технологических режимов выделения биологически активных веществ из сырья животного происхождения. Актуальная биотехнология, 1(16), 17–22.Kashinova, E.B., Kotenkova, E.A., Ertikeeva, E.A., Akhremko, A.G. (2016). Optimization of technological regimes of isolation of biologically active substances from animal raw materials. Current Biotechnology, 1(16), 17–22. (In Russian)Кашинова, Э.Б. (2016). Исследование in vitro биологической активности низкомолекулярных фракций, выделенных из органов желудочнокишечного тракта свиней. Международная научно-практическая конференция молодых учёных и специалистов отделения сельскохозяйственных наук Российской академии наук. Москва: ФНЦ пищевых систем им. В. М. Горбатова РАН, 2016.Kashinova, E.B. (2016). In vitro study of low molecular weight fractions extracted from porcine gastrointestinal organs. International Scientific and Practical Conference of Young Scientists and specialists of the Department of Agricultural Sciences of the RAS.Moscow: Gorbatov Research Center for Food Systems, 2016. (In Russian)Gomathi, D., Ravikumar, G., Kalaiselvi, M., Devaki, K., Uma, C. (2013). Efficacy of evolvulus alsinoides (L.) L. on insulin and antioxidants activity in pancreas of streptozotocin induced diabetic rats. Journal of Diabetes and Metabolic Disorders, 12(1), Article 39. https://doi.org/10.1186/2251–6581–12–39Gomathi, D., Ravikumar, G., Kalaiselvi, M., Devaki, K., Uma, C. (2013). Efficacy of evolvulus alsinoides (L.) L. on insulin and antioxidants activity in pancreas of streptozotocin induced diabetic rats. Journal of Diabetes and Metabolic Disorders, 12(1), Article 39. https://doi.org/10.1186/2251–6581–12–39Дубровина, В.И., Лукьянова, С.В., Юрьева, О.В., Витязева, С.А., Николаев, В.Б., Ястремская, К.Ю. и др. (2015). Оценка иммуногенных свойств антигенного препарата Bacillus anthracis Sternе 34F2 в сочетании с нанокомпозитами (сообщение 3). Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 14(5(84)), 62–66.Dubrovina, V.I., Lukyanova, S.V., Yurieva, O.V., Vityazeva S. A., Nikolaev, V.B., Yastremskaya, K. Yu. et al. (2015). Evaluation of the immunogenic properties of the antigen preparation bacillus anthracis sterne 34F2 combined with nanocomposites (communication 3). Epidemiology and Vaccinal Prevention, 5(84), 62–66. (In Russian)Логунова, Л.В., Зубрильчев, И.В., О. В. Андрианова, О.В. (2013). Динамика структурных преобразований предстательной и поджелудочной желез, а также изменение содержания неферментных катионных белков при некоторых эндокринопатиях. Астраханский медицинский журнал, 4, 86–88.Logunova, L.V., Zubrilchev, I.V., Andrianova, O.V. (2013). The dynamics of structural changes in the prostate gland and pancreas and change in content of non-enzymatic cationic proteins in some endocrinopathy. Astrakhan Medical Journal, 8(4), 86–88. (In Russian)Василевская, Е.Р. (2017). Сравнительное изучение белкового профиля животных экстрактов после заморозки. Международная научнопрактическая конференция, посвящённая памяти Василия Матвеевича Горбатова. Москва: ФНЦ пищевых систем им. В. М. Горбатова РАН, 2017. № 1. — С. 57–58.Vasilevskaya, E.R. (2017). Comparative study on the protein profile of animal extracts after freezing. International scientific and practical conference dedicated to the memory of Vasily Matveyevich Gorbatov, 2017. 1, 57–58. (In Russian)Василевская, Е.Р., Котенкова, Е.А., Лукинова, Е.А., Калинова, Е.А. (2017). Методология исследования белково-пептидных компонентов экстрактов тканей sus scrofa. Теория и практика переработки мяса, 2(3),79–85. https://doi.org/10.21323/2414–438X-2017–2–3–79–85Vasilevskaya, E.R., Kotenkova, E.A., Lukinova, E.A., Kalinova, E.A. (2017). Research methodology of Sus scrofa tissue extracts protein-peptide components. Theory and practice of meat processing, 2(3), 79–85. https://doi.org/10.21323/2414–438X-2017–2–3–79–85UniProt Protein knowledgebase (UniProtKB), 2002–2020. Retrieved from https://www.uniprot.org/ Accessed December 16, 2021UniProt Protein knowledgebase (UniProtKB), 2002–2020. Retrieved from https://www.uniprot.org/ Accessed December 16, 2021Rouimi, P., Anglade, P., Benzekri, A., Costet, P., Debrauwer, L., Pineau, T., Tulliez, J. (2001). Purification and characterization of a glutathione S transferase omega in pig: Evidence for two distinct organspecific transcripts. Biochemical Journal, 358(1), 257–262. https://doi.org/10.1042/0264–6021:3580257Rouimi, P., Anglade, P., Benzekri, A., Costet, P., Debrauwer, L., Pineau, T., Tulliez, J. (2001). Purification and characterization of a glutathione S transferase omega in pig: Evidence for two distinct organspecific transcripts. Biochemical Journal, 358(1), 257–262. https://doi.org/10.1042/0264–6021:3580257Jiang, G., Zhang, B. B. (2003). Glucagon and regulation of glucose metabolism. American Journal of Physiology — Endocrinology and Metabolism, 284(4 47–4), E671-E678. https://doi.org/10.1152/ajpendo.00492.2002Jiang, G., Zhang, B. B. (2003). Glucagon and regulation of glucose metabolism. American Journal of Physiology — Endocrinology and Metabolism, 284(4 47–4), E671-E678. https://doi.org/10.1152/ajpendo.00492.2002Monnet, E., Smeak, D.D. (2020). Anatomy and Physiology of the Stomach. Chapter in a book: Gastrointestinal Surgical Techniques in Small Animals. John Wiley & Sons, 2020.Monnet, E., Smeak, D.D. (2020). Anatomy and Physiology of the Stomach. Chapter in a book: Gastrointestinal Surgical Techniques in Small Animals. John Wiley & Sons, 2020.Liebscher, S., Ambrose, R. L., Aktepe, T. E., Mikulasova, A., Prier, J. E., Gillespie, L. K. et al. (2018). Phospholipase A2 activity during the replication cycle of the flavivirus west nile virus. PLoS Pathogens, 14(4), Article e1007029. https://doi.org/10.1371/JOURNAL.PPAT.1007029Liebscher, S., Ambrose, R. L., Aktepe, T. E., Mikulasova, A., Prier, J. E., Gillespie, L. K. et al. (2018). Phospholipase A2 activity during the replication cycle of the flavivirus west nile virus. PLoS Pathogens, 14(4), Article e1007029. https://doi.org/10.1371/JOURNAL.PPAT.1007029Astudillo, A. M., Balboa, M. A., Balsinde, J. (2019). Selectivity of phospholipid hydrolysis by phospholipase A2 enzymes in activated cells leading to polyunsaturated fatty acid mobilization. Biochimica Et Biophysica Acta — Molecular and Cell Biology of Lipids, 1864(6), 772–783. https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2018.07.002Astudillo, A. M., Balboa, M. A., Balsinde, J. (2019). Selectivity of phospholipid hydrolysis by phospholipase A2 enzymes in activated cells leading to polyunsaturated fatty acid mobilization. Biochimica Et Biophysica Acta — Molecular and Cell Biology of Lipids, 1864(6), 772–783. https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2018.07.002Entwistle, L. J., Pelly, V. S., Coomes, S. M., Kannan, Y., Perez-Lloret, J., Czieso, S. et al. (2017). Epithelial-cell-derived phospholipase A2 group 1B is an endogenous anthelmintic. Cell Host and Microbe, 22(4), 484–493.e5. https://doi.org/10.1016/j.chom.2017.09.006Entwistle, L. J., Pelly, V. S., Coomes, S. M., Kannan, Y., Perez-Lloret, J., Czieso, S. et al. (2017). Epithelial-cell-derived phospholipase A2 group 1B is an endogenous anthelmintic. Cell Host and Microbe, 22(4), 484–493.e5. https://doi.org/10.1016/j.chom.2017.09.006Lang, D. —T., Wang, X. -P., Wang, L., Yu, L. (2017). Molecular evolution of pancreatic ribonuclease gene (RNase1) in Rodentia. Journal of Genetics and Genomics, 44(4), 219–222. https://doi.org/10.1016/j.jgg.2017.03.002Lang, D. —T., Wang, X. -P., Wang, L., Yu, L. (2017). Molecular evolution of pancreatic ribonuclease gene (RNase1) in Rodentia. Journal of Genetics and Genomics, 44(4), 219–222. https://doi.org/10.1016/j.jgg.2017.03.002Haque, N., Prakash Prabhu, N. (2018). Binding orientation and interaction of bile salt in its ternary complex with pancreatic lipase-colipase system. Biochemical and Biophysical Research Communications, 499(4), 907–912. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2018.04.018Haque, N., Prakash Prabhu, N. (2018). Binding orientation and interaction of bile salt in its ternary complex with pancreatic lipase-colipase system. Biochemical and Biophysical Research Communications, 499(4), 907–912. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2018.04.018Ørgaard, A., Holst, J. J. (2017). The role of somatostatin in GLP 1-induced inhibition of glucagon secretion in mice. Diabetologia, 60(9), 1731–1739. https://doi.org/10.1007/s00125–017–4315–2Ørgaard, A., Holst, J. J. (2017). The role of somatostatin in GLP 1-induced inhibition of glucagon secretion in mice. Diabetologia, 60(9), 1731–1739. https://doi.org/10.1007/s00125–017–4315–2Svendsen, B., Holst, J. J. (2021). Paracrine regulation of somatostatin secretion by insulin and glucagon in mouse pancreatic islets. Diabetologia, 64(1), 142–151. https://doi.org/10.1007/s00125–020–05288–0Svendsen, B., Holst, J. J. (2021). Paracrine regulation of somatostatin secretion by insulin and glucagon in mouse pancreatic islets. Diabetologia, 64(1), 142–151. https://doi.org/10.1007/s00125–020–05288–0Чернуха, И.М., Федулова, Л.В., Котенкова, Е.А., Шишкин, С.С., Ковалев, Л.И. (2016). Dлияние автолиза на протеомно-пептидный профиль сердечной мышцы и аорты Bos taurus и Sus scrofa. Теория и практика переработки мяса, 1(2), 4–9. https://doi.org/10.21323/2414–438X-2016–1–2–4–9Chernukha, I.M., Fedulova, L.V., Kotenkova, E.A., Shishkin, S.S., Kovalyov, L.I. (2016). The influence of autolysis on the protein-peptide profile of Bos taurus and Sus scrofa heart and aorta tissues. Theory and practice of meat processing, 1(2), 4–9. https://doi.org/10.21323/2414-438X-2016–1–2–4–9 (In Russian)Mosolov, V.V., Valueva, T.A. (2011). Inhibitors of proteolytic enzymes under abiotic stresses in plants (Review). Applied Biochemistry and Microbiology, 47(5), 453–459. https://doi.org/10.1134/S0003683811050097Mosolov, V.V., Valueva, T.A. (2011). Inhibitors of proteolytic enzymes under abiotic stresses in plants (Review). Applied Biochemistry and Microbiology, 47(5), 453–459. https://doi.org/10.1134/S0003683811050097Гагарина, И.Н., Горькова, И.В., Костромичева, Е.В., Ботуз, М.И. (2015). Ингибиторы ферментов трипсина и химотрипсина в картофеле. Современные тенденции развития науки и технологий, 3–2, 49–51.Gagarina, I.N., Gorkova, I.V., Kostromicheva, E.V., Botuz, M.I. (2015). Inhibitors of trypsin and chymotrypsin enzymes in potatoes. Modern Trends in the Development of Science and Technology, 3–2, 49–51. (In Russian)Петибская, B. C. (1999). Ингибиторы протеолитических ферментов. Известия высших учебных заведений. Пищевая технология, 5–6(252– 253), 6–10.Petibskaya, B. C. (1999). Proteolytic enzyme inhibitors. Izvestiya Vuzov. Food Technology, 5–6, 6–10. (In Russian)Никифорова Т. Е. (2007). Безопасность продовольственного сырья и продуктов питания. Иваново: Ивановский государственный химико-технологический университет, 2007.Nikiforova, T.E. (2007). Safety of food raw materials and food products. Ivanovo: Ivanovo State University of Chemical Technology, 2007. (In Russian)Поляков, В.Ф., Ипатова, О.М., Усачев, И.И. (2018). Ингибиторы протеаз молозива млекопитающих, их функция в процессах пищеварения и защите организма животных. Вестник Брянской государственной сельскохозяйственной академии, 5(69), 34–41.Polyakov, V.F., Ipatova, O.M., Usachev, I.I. (2018). Mammals’ colostrum protease inhibitors, their function in digesting and protection of animals. VESTNIK of the Bryansk State Agricultural Academy, 5(69), 38–41. (In Russian)Сереброва С. Ю. (2006). Перспективы применения ферментных препаратов в гастроэнтерологии. Болезни органов пищеварения, 8(1), 23–27.Serebrova, S. Yu. (2006). Prospects for the use of enzyme preparations in gastroenterology. Diseases of the Digestive System, 8(1),23–27. (In Russian)Немова, Н. Н., Бондарева, Л. А. (2008). К вопросу об эволюции протеолитических ферментов. Биомедицинская химия, 54(1), 42–57.Nemova, N. N., Bondareva, L. A. (2008). To the problem of proteolytic enzyme evolution. Biomeditsinskaya Khimiya, 54(1), 42–57. (In Russian)Protease-Inhibitor Mix M. Serva. Serving scientists. Retrieved from https://serva.de/enDE/ProductDetails/810_39102_Protease_Inhibitor_Mix_M_0_0.html Accessed May 20, 2021.Protease-Inhibitor Mix M. Serva. Serving scientists Retrieved from https://serva.de/enDE/ProductDetails/810_39102_Protease_Inhibitor_Mix_M_0_0.html Accessed May 20, 2021Pamirsky, I. E., Borodin, E. A., Shtarberg, M. A. (2012). Regulation of Proteolysis of Plant and Animal Inhibitors. LAP Lambert Academic Publishing, 2012.Pamirsky, I. E., Borodin, E. A., Shtarberg, M. A. (2012). Regulation of Proteolysis of Plant and Animal Inhibitors. LAP Lambert Academic Publishing, 2012.Cotabarren, J., Lufrano, D., Parisi, M. G., Obregón, W. D. (2020). Biotechnological, biomedical, and agronomical applications of plant protease inhibitors with high stability: A systematic review. Plant Science, 292, Article 110398. https://doi.org/10.1016/j.plantsci.2019.110398Cotabarren, J., Lufrano, D., Parisi, M. G., Obregón, W. D. (2020). Biotechnological, biomedical, and agronomical applications of plant protease inhibitors with high stability: A systematic review. Plant Science, 292, Article 110398. https://doi.org/10.1016/j.plantsci.2019.110398

The authors declare that there are no conflicts of interest present.